ZHIXUAN Universal DNA Library Prep Kit for MGI

 

Kit de preparação de biblioteca universal de DNA ZHIXUAN para MGI

Sequenciamento do genoma completo | Sequenciamento do amplicon | Sequenciamento de imunoprecipitação | Sequenciamento metagenômico | Sequenciamento de metilação | Sequenciamento de 16srDNA | Sequenciamento direcionado

O ZHIXUAN Universal DNA Library Prep Kit para MGI é um kit de preparação de biblioteca especialmente otimizado para a plataforma de sequenciamento de alto rendimento MGI. Este kit pode converter 100 pg - 4 μg de DNA de entrada em bibliotecas dedicadas para a plataforma de sequenciamento de alto rendimento MGI. Como uma nova versão atualizada, o ZHIXUAN Universal DNA Library Prep Kit para MGI melhorou significativamente a taxa de conversão da biblioteca e a saída de amplificação da biblioteca por meio de melhorias gerais no módulo de reparo final, módulo de conexão e módulo de amplificação da biblioteca. É amplamente utilizado na construção de bibliotecas de PCR de vários tipos de amostras. Todos os reagentes fornecidos no kit passaram por rigoroso controle de qualidade e validação funcional, o que garante muito a estabilidade e repetibilidade da construção da biblioteca.

·  Menor tempo de preparação da biblioteca, uma única preparação da biblioteca leva apenas 75 minutos

·  Maior eficiência de conexão do adaptador, maior taxa de conversão de biblioteca

·  Operação mais fácil e rápida, a pré-mistura reduz erros de operação

·  Maior faixa de compatibilidade de modelo, o DNA de entrada inicial pode ser de 100 pg a 4 μg

·  Maior compatibilidade de amostras, adequada para DNA fragmentado, cfDNA, DNA FFPE, DNA ChIP, etc.

Composição	NDM607-01 (24 rxns)	NDM607-02 (96 rxns)
Fim da preparação da mistura 4	360 μl	4 × 360 μl
Buffer de Ligação Rápida 2	600 μl	4 × 600 μl
Ligase de DNA rápida	120 μl	480 μl
Mix de amplificação de alta fidelidade ZHIXUAN	600 μl	4 × 600 μl
Mistura de primers de PCR para MGI	120 μl	480 μl
DNA de controle (264 pb,50 ng/μl)	10 μl	10 μl

O produto deve ser armazenado em ambiente com temperatura entre -30°C a -15°C.

Para transporte, é necessária uma faixa de temperatura entre -20°C e 0°C.

Perguntas frequentes

Q1: Baixa saída da biblioteca

R(1) Quantifique novamente a quantidade do modelo de entrada para verificar se a quantidade do modelo inicial está correta. Se estiver abaixo do limite inferior (100 pg), a quantidade de entrada do modelo deve ser aumentada;

(2) Se a qualidade do modelo for ruim, o número de ciclos pode ser aumentado apropriadamente de acordo com o IFU ou modelos de alta quantidade podem ser usados;

(3)  Verifique se cada etapa do sistema e procedimento é realizada de acordo com o IFU e preste atenção aos detalhes de cada operação em cada etapa;

(4)  O processo de secagem das esferas magnéticas de purificação da biblioteca não deve ser muito longo, o que faz com que as esferas magnéticas fiquem muito secas. A secagem excessiva também reduzirá a saída;

(5)  Ao conduzir a amplificação da biblioteca, certifique-se de que não haja resíduos de esferas magnéticas. Caso contrário, pode inibir a reação de amplificação;

(6)  Ao quantificar a biblioteca qPCR, certifique-se de que o tempo do ciclo e o número de ciclos estejam corretos.

 Q2: Após a construção da biblioteca, a proporção de quimeras é alta.

R2:  Essa situação é devido à superamplificação. Bibliotecas superamplificadas são amplificações não específicas causadas por incompatibilidades diretas entre bibliotecas quando os primers foram esgotados, e quimeras não intencionais são introduzidas. 

 Q3: O mesmo índice é adicionado a amostras diferentes, como resolver isso?
R3:  Separe amostras com o mesmo índice em diferentes faixas para sequenciamento.

 Q4: O Agilent 2100 detecta uma característica de pico distinta de dímeros adaptadores.
R4:
(1) O multiplicador da purificação de esferas magnéticas pode ser adequadamente reduzido;
(2)  A concentração do adaptador pode ser adequadamente reduzida.

 Q5: Outras notas de operação

A5: 
(1) Antes de usar, descongele cada reagente do kit em temperatura ambiente. Após o descongelamento, inverta cada reagente várias vezes para misturar completamente, centrifugue brevemente e coloque-os no gelo para uso posterior;

(2)  Ao preparar a solução de reação para cada etapa, é recomendado usar pipetas para misturá-la adequadamente. A agitação intensa pode causar diminuição na saída da biblioteca.
(3) Para evitar contaminação cruzada de amostras, é recomendado usar pontas de pipeta com filtro. Troque a ponta da pipeta ao manusear amostras diferentes.

(4)  É recomendado realizar cada etapa da reação em um instrumento de PCR com uma tampa de aquecimento. O instrumento de PCR deve ser pré-aquecido próximo à temperatura de reação antes do uso.

(5)  Os produtos de PCR podem facilmente levar à contaminação por aerossol devido à operação inadequada, o que afetará a precisão dos resultados do teste. Portanto, recomendamos o isolamento físico obrigatório entre a área de preparação do sistema de reação de PCR e a área de detecção de purificação do produto de PCR, além de usar pipetas dedicadas e limpar regularmente cada área experimental (usando hipoclorito de sódio a 0,5% ou alvejante a 10% para limpeza) para garantir a limpeza do ambiente experimental.